Фолиевая кислота

(Птероилглутаминовая кислота)

Качественные реакции

1. Получение азокрасителя (см. ниже).

2. Спектр поглощения в ультрафиолете (при рН 11) имеет максимум при 255, 282 и 365 ммк.

Количественное определение

При восстановлении фолиевой кислоты в солянокислом растворе цинковой пылью в числе других продуктов отщепляется пара-амино-бензойная кислота, которую диазотируют нитритом натрия. Полученная соль диазония сочетается с ]М-(1-нафтил)-этилендиаминди-гидрохлоридом в присутствии сульфамата аммония NH₂S0₂ ONH₄:

При этом наблюдается фиолетовая окраска раствора, интенсивность которой пропорциональна концентрации и измеряется в фотоколориметре или в спектрофотометре.

Требуются реактивы: 1) раствор желатины (1,5 г желатины и 0,1 г бензойной кислоты растворяют в 100 мл воды), 2) 10%-ный раствор соляной кислоты, 3) 0,1%-ный раствор нитрита натрия, 4) 8%-ный раствор мочевины¹ и 5) 0,1%-ный раствор 1М-(1-наф-тил)-этилендиаминдигидрохлорида.

Точно 0,05 г пара-аминобензойной кислоты с температурой плавления 186-187° отвешивают в стаканчике емкостью 15-20 мл, растворяют в 96%-ном этиловом спирте, переливают в мерную колбу емкостью 50 мл, стаканчик промывают 3-4 раза спиртом (общее количество спирта 25 мл), раствор доводят водой до метки и перемешивают. Из этого раствора отбирают 1 мл в колбу емкостью 250 мл, прибавляют 175 мл воды, 45 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, 2,5 мл раствора желатины, доводят до метки водой и перемешивают. В 1 мл раствора содержится 0,004 мг пара-аминобензойной кислоты.

В четыре колбы емкостью 15-20 мл вливают пипеткой 1, 2, 3 и 4 мл приготовленного раствора и доводят объем раствора в каждой колбе водой до 5 мл и прибавляют по 0,7 мл 10%-ного раствора соляной кислоты, по 1 мл 0,1%-ного раствора нитрита натрия, хорошо перемешивают и оставляют на 5 минут. Затем в каждую колбу

прибавляют по 1 мл 8%-ного раствора мочевины, перемешивают и вновь оставляют на 5 минут. После этого в каждую колбу прибавляют по 1 мл 0,1%-ного раствора ]Ч-(1-нафтил)-этилендиаминдигид-рохлорида, по 1,3 мл воды, перемешивают, оставляют на 10 минут и затем определяют окраски раствора" электрофотоколориметром со светофильтром 550 ммк. Для получения стандартной кривой на оси ординат наносят показания гальванометра, а на оси абсцисс - количество миллиграммов и соединяют прямой линией точки пересечения перпендикуляров, восстановленных из соответствующих точек осей графика.

25.06.2015