Витамин B12

 

Витамин B₁₂

382_01

 

Качественные реакции

Раствор витамина В₁₂ имеет характерный спектр поглощения в ультрафиолете с максимумами при 278, 361 и 548 ммк и коэффициентами поглощения в указанных точках соответственно 115, 207 и 64, причем коэффициент поглощения при 361 ммк для препаратов обычной очистки превышает в 2,8-3,4 раза коэффициент поглощения при 548 ммк.

Количественное определение

1.Спектрофотометрический метод. В растворах ампулированных препаратов в кювете спектрофотометра (в 1 см толщины) определяют коэффициент поглощения при 548 ммк. Содержание витамина В₁₂ в 1 мл испытуемого раствора вычисляют по

формуле. Количество витамина   В₁₂ в микрограммах -^-,   где

Е - наблюдаемый коэффициент поглощения; 64 - коэффициент поглощения для 1%-ного раствора витамина В₁₂, т. е. при содержании 1000 микрограммов в 1 мл; 10⁴ - коэффициент пересчета концентрации витамина В₁₂ с 1% в микрограммы на 1 мл.

2. Колориметрический метод. При отсутствии спектрофотометра пользуются фотоэлектроколориметром с зеленым светофильтром. Содержание витамина В₁₂ в испытуемом образце определяют путем измерения коэффициента поглощения. По найденному коэффициенту, пользуясь калибровочной кривой, устанавливают какое количество витамина В₁₂ ему соответствует. Для составления калибровочной кривой для колориметра ФЭК берут растворы чистого витамина В₁₃ с содержанием 10, 15, 20, 25 и 30 мкг в 1 мл и определяют коэффициенты поглощения, пользуясь кюветами в 1 см толщиной.

Откладывая по оси абсцисс содержание витамина В₁₃, а по оси ординат коэффициенты поглощения, строят калибровочную кривую, по которой и отсчитывают, какому количеству витамина В₁₂ соответствует коэффициент поглощения испытуемого образца.

25.06.2015