Что представляют собой фармакопейные испытания на подлинность?
Целью фармакопейных испытаний на подлинность, как известно, является подтверждение при помощи химических реакций или физико-химических констант идентичности испытуемого вещества (или смеси веществ) предполагаемому соединению (или нескольким соединениям), которое входит в состав исследуемого лекарственного средства и обозначено на его этикетке. Это отличает идентификацию лекарственных веществ и лекарственных форм от исследования неизвестного вещества.
Для фармакопейных испытаний на подлинность характерно использование так называемых общегрупповых реакций в сочетании с реакциями специфичными, избирательными для данного соединения.
В фармацевтической практике химику-аналитику чаще приходится встречаться с анализом готовых лекарственных форм, чем лекарственных веществ в чистом виде, за исключением аптеки, где химик-аналитик в основном проводит анализ индивидуальных лекарственных веществ. Если для большинства лекарственных веществ реакции на подлинность могут быть выполнены непосредственно с веществом и без особых затруднений, то те же самые реакции могут быть исключены в случае анализа готовых лекарственных форм. Поэтому общепринятыми стадиями идентификации лекарственных форм после выделения активных ингредиентов являются определение физических констант, реакции на функциональные группы, получение и анализ производных.
Необходимость выделения и разделения активных ингредиентов вызывается наличием в лекарственных готовых формах соединений, которые могут влиять на результаты анализа. Такими веществами могут являться в таблетках наполнители (крахмал, молочный сахар, свекловичный сахар, желатин) и вещества, способствующие грануляции (стеарат кальция, стеарат магния, тальк и т. п.), в растворах для инъекций стабилизаторы (сульфит натрия, формальдегид сульфоксилат, бисульфит натрия и аскорбиновая кислота) и антибактериальные агенты (бензойная кислота, эфиры п-аминобензойной кислоты и т. п.). К этой же группе следует отнести вещества, применяемые для исправления вкуса и придания запаха.
Экстрагирование является наиболее часто применяемым процессом в анализе лекарственных форм. Иногда активные ингредиенты извлекают путем применения нескольких различных растворителей, как, например, при идентификации преднизолона в таблетках по ГФХ.
1 г порошка растертых таблеток помещают в небольшую колбу, прибавляют 20 мл хлороформа, перемешивают в течение 5 минут, фильтруют в фарфоровую чашку и упаривают фильтрат на водяной бане до 5 мл. Добавляют при перемешивании 15 мл изооктана, выпавший осадок отфильтровывают и высушивают. 0,01 г полученного осадка растворяют в 1 мл метилового спирта, прибавляют 1 мл реактива Фелинга и нагревают; образуется желто-оранжевый осадок.
1 мг осадка преднизолона растворяют в 2 мл концентрированной серной кислоты. Через несколько минут появляется красное окрашивание.
Простое растирание твердой лекарственной формы с растворителем не может обеспечить количественный выход экстрагируемого вещества, однако в ряде случаев оно приемлемо для целей качественного анализа.
В случае таблеток, покрытых оболочками, содержащими пшеничную муку, крахмал, сахар, декстрин, карбонат магния, масла растительные, какао, воск, пищевые краски и лаки, ацетилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу и т. п., извлечение составных частей становится неизбежным.
В равной мере это относится к инъекционным масляным растворам. В частности, таким образом анализируют раствор тестостерона пропионата в масле для инъекций по ГФХ.
6 мл 1% или 3 мл 5% препарата помещают в делительную воронку, прибавляют 80 мл петролейного эфира, насыщенного 90% спиртом, и извлекают 90% спиртом, насыщенным петролейным эфиром, 3 раза по 20 мл.
Объединенные спиртовые извлечения встряхивают с петролейным эфиром, насыщенным 90% спиртом, 3 раза по 20 мл, делят на две части, и спирт отгоняют досуха.
К одному остатку прибавляют 5 мл 1% спиртового раствора едкого кали, присоединяют обратный холодильник и кипятят на водяной бане в течение 30 минут. К охлажденному раствору прибавляют 15 мл воды и избыток щелочи нейтрализуют 0,1 н. раствором соляной кислоты. Охлаждают во льду в течение часа, выпавший осадок отфильтровывают, промывают водой и петролейным эфиром и сушат в сушильном шкафу при 100°. Температура полученного тестостерона 149-156°.
Ко второму остатку прибавляют 5 мл 95% спирта и далее поступают, как описано в третьей реакции подлинности, указанной в статье «Testosteroni propionas»; появляется красно-бурое или бурое окрашивание.
Распределительная хроматография на бумаге может быть использована для разделения и идентификации смеси веществ, применяемых в небольших количествах, или для определения подлинности некоторых антибиотиков полипептидного типа.
Растворяют 5 мг в смеси 0,5 мл соляной кислоты и 0,5 мл воды и нагревают в запаянной пробирке при 125° в течение 2 1/2 часов. Затем раствор выпаривают досуха на водяной бане, продолжая нагревание до удаления запаха хлористого водорода, растворяют остаток в 0,5 мл воды. Наносят 0,005 мл этого раствора и 0,005 мл раствора» содержащего 10 мкг лейцина, фенилаланина, треонина и серина, на полосу фильтровальной бумаги длиной 55 см и хроматографируют в системе растворителей: бутанол - ледяная уксусная кислота-'вода - 4:1:5 в течение 12 часов. Проявляют хроматограмму 0,5% раствором ниигидрина в бутаноле, насыщенном водой, с последующим нагреванием при 90° в течение 5 минут. Хроматограмма, полученная из гидролизованного поли-миксина, имеет пятна, соответствующие пятнам лейцина, фенилаланина и треонина, но не имеет заметного пятна, соответствующего серину; она может иметь медленно движущееся пятно (Rf=0,03), обусловленное а, γ-диаминомасляиой кислотой. (Полимиксина сульфат, Международная фармакопея. Второе издание.)
26.05.2015