Как осуществляют количественное определение сапонинов?

 

Единого точного метода количественного определения сапонинов в сырье нет, ввиду их разнообразного строения.

• 1. Ранее использовали гравиметрический метод, основанный на физических свойствах сапонинов: разной растворимости гликозидов и агликонов. Сапонины из сырья экстрагируют метиловым или этиловым спиртом в аппарате Сокслета. Экстракт упаривают под вакуумом, сапонины осаждают органическим растворителем; отфильтровывают, промывают, высушивают до постоянной массы и взвешивают. Результаты получаются завышенные, так как кроме сапонинов осаждаются сопутствующие вещества. Более точные результаты могут быть получены, если провести гидролиз суммы сапонинов, отделить агликоны, высушить и взвесить.
• 2. В настоящее время для определения суммы сапонинов и индивидуальных веществ используют физико-химические методы (спектрофотометрия, колориметрия), основанные на способности сапонинов при нагревании давать окрашенные продукты с кислотными реагентами. Например, при определении суммы сапонинов каштана конского, синюхи голубой используют кобальта хлорид с кислотой серной концентрированной; женьшеня - ванилин с кислотой серной концентрированной, стероидных сапонинов - п-диметил-аминобензальдегид в 4 моль/л растворе кислоты хлористоводородной. Калибровочные графики строят по стандартному образцу (например, эсцину) или кобальта хлориду. Эти методы часто используют в сочетании с предварительным хроматографическим разделением суммы сапонинов.

Для кислых сапонинов (например, аралозиды) используют потенциометрическое титрование после предварительного гидролиза сапонинов.

Иногда для сырья, содержащего сапонины (при научных исследованиях) определяют пенное число и гемолитический индекс.

Пенное число - наименьшая концентрация извлечения из 1 г сырья, при встряхивании которого в течение 15 сек образуется устойчивая в течение 15 мин пена. Основан на физических свойствах сапонинов.

Гемолитический индекс - наименьшая концентрация извлечения из 1 г сырья или раствора чистого сапонина, которая вызывает гемолиз эритроцитов, содержащихся в 1 мл 2 % раствора дефибринированной крови барана. Извлечение сапонинов и разведение проводят изотоническим раствором.

Готовится серия разведений и определяется наименьшая концентрация. При работе с кровью других животных параллельно ставят контроль со стандартным сапонином (0,02 % раствор дигитонина).

Результаты выражают соотношением массы сырья (1 г) и разведения. Напр. 1 : 5000, 1 : 20000 и т.д.

Эти методы не дают представленияо количественном (%) содержании сапонинов, а свидетельствуют о поверхностной или гемолитической активности.

26.05.2015