Как проводятся испытания испытания на сульфаты

 

Растворы сульфатов в зависимости от их концентрации дают с растворами солей бария белый осадок или муть, не исчезающие от прибавления разведенной соляной кислоты.

К 10 мл раствора испытуемого препарата указанной в статье концентрации, доведенного, если нужно, до нейтральной реакции соляной кислотой или раствором аммиака, прибавляют 0,5 мл разведенной соляной кислоты и 1 мл раствора хлорида бария, перемешивают и через 10 минут сравнивают с эталоном, состоящим из 10 мл 0,001 % раствора сульфат-иона и такого же количества реактивов, какое было добавлено к испытуемому раствору.

Муть, появившаяся в испытуемом растворе, не должна превышать эталон.

Имеются указания на плохую воспроизводимость реакции, выполненной в таком виде. Испытание может быть улучшено применением в качестве осаждающего агента реактива, содержащего небольшое количество сульфата бария (seeding reagent).

Сульфат бария ускоряет осаждение примеси сульфата и делает его более полным. Ниже приводится методика, принятая Международной фармакопеей Второго издания и Британской фармакопеей 1968 г. в варианте с уменьшенным количеством раствора.

К 1,5 мл раствора, содержащего 10 мг S0₄^-2 в 1 л, прибавляют при постоянном взбалтывании 0,75 мл 95% спирта, 0,50 мл 0,25 М раствора хлорида бария и 0,25 мл соляной кислоты.

Продолжают взбалтывание в течение 30 секунд и затем прибавляют 15 мл исследуемого раствора, подкисленного прибавлением 0,30 мл соляной кислоты.

В то же время и при тех же условиях готовят раствор, для сравнения используя 15 мл эталонного раствора, подкисленного 0,3 мл соляной кислоты.

Испытания на предельное содержание хлоридов, сульфатов, тяжелых металлов, сульфатной золы и мышьяка являются общими для всех лекарственных средств и лишь косвенным образом характеризуют качество исследуемых объектов тем более, что определение мышьяка исключено из большинства современных фармакопеи при анализе органических веществ.

Дополнительными испытаниями являются оценка окраски и прозрачности растворов, что может регламентировать пригодность лекарственного вещества для приготовления лекарственных форм. По реакции раствора в определенной степени можно судить о загрязненности кислыми или щелочными агентами вследствие недостаточной очистки вещества или его разложения. Наконец, испытание с концентрированной серной кислотой позволяет обнаруживать посторонние органические вещества, разрушающиеся с образованием окрашенных растворов при действии этого реактива.

Несомненно, что наибольшую ценность представляют испытания на специфические примеси, которыми могут быть как промежуточные продукты синтеза, так и разложениями которые оказывают влияние на фармакологическое действие лекарственного средства. Для этой цели применяются колориметрические, спектрофотометрические, хроматографические методы или методы, основанные на хроматографическо разделении с последующей оценкой отдельных компонентов.

Предельное содержание свободной салициловой кислота, образующейся в результате гидролиза ацетилсалициловой кислоты, устанавливается по общеизвестной цветной реакции с солями окисного железа при условии сравнения полученного окрашивания с окрашиванием эталонного раствора.

0,3 г препарата растворяют в 5 мл спирта и прибавляют 25 мл воды (испытуемый раствор). В один цилиндр помещают 15 мл этого раствора, в другой 5 мл того же раствора, 0,5 мл 0,01% водного раствора салициловой кислоты, 2 мл спирта и доводят водой до 15 мл (эталонный раствор). Затем в оба цилиндра добавляют по 1 мл кислого 0,2% раствора железоаммоииевых квасцов. Окраска испытуемого раствора не должна быть интенсивнее эталонного раствора (не более 0,05% в препарате) (ГФХ).

В таблетках ацетилсалициловой кислоты предельное содержание салициловой кислоты, согласно ГФХ, может составлять не более 0,25%'.

Возможной примесью в фенацетине может являться п-хлорацетанилид, с наличием которого связывают ряд побочных реакций фенацетина и, следовательно, содержание которого должно нормироваться. Для этой цели Государственная фармакопея СССР X издания и Второе издание Международной фармакопеи используют мало специфический метод переведения органически связанного хлора в хлорид-ион нагреванием с катализатором никелем Ренея. Затем содержание хлорида определяют сравнением с эталонным раствором. Более специфический хроматографический метод рекомендуется XVII изданием Фармакопеи США.

Методика определения п-хлорацетанилида в фенацетине по Фармакопее США XVII издания.

Стандартный препарат - растворяют 15 мг п-хлорацетанилида в спирте до получения 100 мл. Переносят 1 мл этого раствора в мерную колбу емкостью 10 мл, прибавляют 500 мг стандартного образца фенацетина и растворяют в спирте и доводят спиртом до метки.

Испытуемый препарат - растворяют, нагревая на водяной бане, 500 мг фенацетина в спирте до получения 10 мл.

Методика. Готовят лист бумаги (ватман № 1 или равноценная) размером 19X28 см для восходящей хроматографии, наносят стартовую линию на расстоянии 5 см от края и параллельно одному из узких краев. Отмечают места на стартовой линии на расстоянии 2 см друг от друга для нанесения стандартного и испытуемого препаратов. Пропитывают бумагу неподвижной фазой, быстро пропуская ее через свежеприготовленный раствор, состоящий из двух объемов формамида и 8 объемов ацетона, в стеклянной кювете. Начиная с конца, ближе к стартовой линии, протягивают остаток бумаги быстро и равномерно через раствор, давая избытку растворителя стекать через конец бумаги, противоположный стартовой линии. Дают бумаге высыхать 10 минут, затем наносят по 10 мкл испытуемого и стандартного растворов. Дают растворителю выпариться, затем на каждую из тех же точек наносят около 3 мкл неподвижной фазы. Тотчас перед внесением приготовленной бумаги в чистую и сухую хроматографическую камеру помещают достаточное количество изопропилового спирта для получения слоя глубиной около 2 мм.

Помещают бумагу в камеру таким образом, чтобы она была погружена в растворитель, закрывают камеру и хроматографируют до тех пор, пока растворитель не продвинется на 5 см выше стартовой линии (около 30 минут). Вынимают хроматограмму, высушивают на воздухе в течение 5 минут, затем часть бумаги около линии фронта растворителя подвергают воздействию интенсивного ультрафиолетового коротковолнового излучения (254 ммк) на расстоянии 2,5 см до получения максимума флюоресценции с пятном п-хлорацетанилида (около 5 минут). Сразу же оценивают пятна с ультрафиолетовой лампой для длинноволновой области, имеющей фильтр, пропускающий при 365 ммк ; любое голубое флюоресцирующее пятно, имеющее то же значение Rf, что и пятно п-хлорацетанилида, в стандартном препарате не превышает последнее по размеру и интенсивности (0,03%).

Также хроматографированием на бумаге определяют примесь метилтестосгерона в метандростенолоне по ГФХ.

На полосу быстрофильтрующей бумаги для хроматографирования (8X30 см), пропитанной 50% раствором формамида в метиловом спирте, наносят 0,02 мл (1000 мкг) 5% хлороформного раствора препарата и на расстоянии 2-3 см 0,01 мл (10 мкг) 0,1% спиртового раствора стандартного образца метилтестостерона. Хроматографируют нисходящим методом в камере со смесью бензол-изооктан (1 : 1) до тех пор, пока фронт растворителя не пройдет около 25 см. Подсушенную на воздухе хроматограмму просматривают на ультрахимископе через люминесцентную пластинку. Посторонние пятна на хроматограмме должны отсутствовать. Допускается пятно метилтестостерона, расположенное на уровне пятна стандартного образца и не превышающее его по совокупности величины и интенсивности (не более 1 % в препарате).

Во втором издании Международной фармакопеи описано испытание на чистоту таблеток эргометрина малеата методом тонкослойной хроматографии на окиси алюминия, имеющей щелочную реакцию (рН около 9,5). Все алкалоиды группы эргометрина, встречающиеся в виде продуктов перегруппировки, распада я как сопутствующие вещества, разделяются ib условиях описанного ниже определения.

Растирают навеску измельченных таблеток, соответствующую 2,5 мг эргометрина малеата с 1,5 мл 1% раствора соли четвертичного основания, например, метил-фенил-додецил-триметиламмония хлорида, переносят ее количественно 1 % раствором виннокаменной кислоты в мерную колбу емкостью 50 мл и доводят тем же раствором до метки. Встряхивают содержимое колбы и фильтруют через беззольный фильтр, отбрасывая первые 10 мл фильтрата. Подщелачивают 25 мл фильтрата 10% раствором бикарбоната натрия по лакмусу и извлекают 5 порциями, каждая по 10 мл, хлороформа, не содержащего этанола и фосгена. Фильтруют отдельные извлечения через двойной фильтр, промывая его хлороформом, и выпаривают объединенные хлороформные извлечения досуха при 20° в вакууме. Растворяют остаток в 0,5 мл смеси, содержащей 5%) пиридина в метанол-хлороформе (1 : 1), и наносят на пластинку 20 мкл (50 мкг), отмечая место нанесения как пятно «А».

Растворяют 5 мг стандартного образца эргометрина малеата в 10 мл 1%) раствора виннокаменной кислоты и поступают, как указано выше. Наносят на пластинку 1 мкл (2,5 мкг) в виде пятна «Б».

Хроматографируют дважды, используя в качестве подвижной фазы смесь хлороформ - метанол (99 : 1). Высушивают пластинку в токе теплого воздуха, опрыскивают 0,8%) раствором пара-диметиламинобензаль-дегида в смеси 20 г концентрированной серной кислоты и 80 г 95%) спирта, сушат снова и держат 1-2 секунды в атмосфере насыщенной соляной кислоты. Вещества обнаруживаются в виде синих пятен.

Возможно получающиеся пятна Значения Rf

Эргометрин 0,2

Эргометринин 0,5

Амид лизергиновой кислоты 0,3

Амид изолизергиновой кислоты 0,6

Пятна, полученные с исследуемым веществом, стартовое пятно «А», должны отвечать следующим требованиям. Пятно эргометринина не должно быть больше по размеру и интенсивнее по окраске, чем стандартное пятно «Б», что соответствует максимальному содержанию 5% эргометрина.

26.05.2015