Флюориметрия

 

Флюоресцентный (люминесцентный) метод анализа-основан на исследовании спектров испускания анализируемых веществ.

Этот метод применяется как для идентификации веществ по цвету люминесцирующего излучения, так и для количественного анализа по определению интенсивности люминесценции, изме­ряемой специальными приборами, называемыми флюориметра-ми. В эксперименте флюоресценцию многих веществ вызывают облучением УФ-светом. Например, молекулы кофеина и нико­тина в УФ-свете имеют фиолетовую флюоресценцию; папаве­рин, совкаин, барбамил - голубую; кодеин, но-шпа - желтую; резерпин, катарнина-гидрохлорид - желто-зеленую. Это свой­ство используется для идентификации препаратов.

В ГФ X реакции подлинности по цвету флюоресценции при­няты для многих препаратов, например димитина, метилтиоура-цила, прогестерона, резерпина, рибофлавина, хинина гидрохло­рида и др.

На интенсивность флюоресценции влияют следующие фак­торы: концентрация вещества в растворе, природа растворите­ля, температура, рН среды, присутствие посторонних веществ-.

Флюоресценцию обычно определяют в растворах с концент­рацией вещества не более Ю^-4-Ю^-5 г/мл.

Увеличение концентрации флюоресцирующего вещества при­водит к уменьшению или полному исчезновению (гашению) флюоресценции.

Гашение флюоресценции может быть вызвано и другими причинами, например химическим взаимодействием посторон­них веществ с флюоресцирующим веществом, в результате ко­торого образуются нефлюоресцирующие продукты реакции.

Некоторые лекарственные вещества сами не флюоресцируют; а приобретают способность к флюоресценции в результате хими­ческой реакции. Например, тиамин и кокарбоксилаза с ферри-цианидом калия в щелочном растворе образуют тиохром, кото­рый под влиянием УФ-света флюоресцирует голубым цветом.

Адреналин, фолиевая кислота в результате химических пре­вращений образуют флюоресцирующие продукты реакции, по которым идентифицируют эти препараты.

Количественное содержание анализируемого вещества опре­деляют с помощью прибора, называемого флюориметром, путем сравнения интенсивности флюоресценции раствора испытуемого вещества с интенсивностью флюоресценции раствора стандарт­ного образца известной концентрации. Наблюдение проводят в одинаковых условиях с чистым растворителем.

Содержание чистого вещества в препарате (X) вычисляют по формуле:

 

где: с - концентрация раствора стандартного образца; п - по­казание флюориметра для исследуемого раствора; т - показа­ние флюориметра для раствора стандартного образца; «2 - по­казание флюориметра для контрольного раствора.

Так как интенсивность флюоресценции прямо пропорцио­нальна концентрации вещества в очень узкой области, то отно­шение "~~"²   должно быть не менее 0,4 и не более 2,50. Относительная ошибка флюориметрического метода составляет 2-5%.

27.06.2015